Općenito

Prijenos embrija u Mares

Prijenos embrija u Mares

Prijenos embrija je tehnika potpomognute reprodukcije kojom se zametak prenosi iz maternice kobila darivatelja u maternicu kobilice koja će prevesti trudnoću. Embrio se obično izvlači iz kobile darivatelja ispiranjem maternice (ispiranjem) otprilike 6 do 8 dana nakon ovulacije. Embrio se zatim smješta u maternicu sinkronizirane kobilice primatelja.

Prednosti

  • Vrijedna kobila može proizvesti više od jedne ždrebice u sezoni.
  • Kobile se mogu natjecati dok proizvode ždrebice.
  • Mlade, genetski vrijedne kobile mogu započeti s proizvodnjom ždrebadi prije nego što postignu fizičku zrelost ili dok su na treningu.
  • Stare kobile nesposobne same za sobom nositi ždrebicu zbog patologije temeljene na biopsiji maternice mogu i dalje proizvoditi ždrebice.
  • Kobile s tjelesnim oštećenjima koje sprečavaju trudnoću ili ždrijebanje poput trzanja trbušnih mišića ili stare prijelome karlice još uvijek mogu stvoriti potomstvo.

    Nedostaci

  • Procedura je skupa.
  • Ograničenja ili zabrana nameću neke udruge pasmina.
  • Izvođenje prenosa embrija kod kobila zahtijeva specijaliziranu obuku i stoga nisu svi kopitari ili praktičari spremni ponuditi ovu uslugu

    Uspjeh ovog postupka ovisi o sposobnosti kontrole bilo kojeg od sljedećih čimbenika:

  • Inherentna plodnost kobile darivatelja koja se ne može kontrolirati. Nadalje, u mnogim slučajevima subfertilnost je razlog zbog kojeg neke kobile postaju kandidati za prijenos embrija.
  • Urođena plodnost primaoskih kobila. Te kobile bi trebale biti izabrane na temelju mladosti i normalnog reproduktivnog trakta.
  • Upravljanje uzgojem ili vrijeme uzgoja trebaju biti prikladni za obavljanje prijenosa embrija.
  • Tehnika oporavka i prenošenja zametaka. Iskustvo veterinara igra važnu ulogu u uspjehu postupka.
  • Stupanj sinkronizacije davatelja i primatelja. Kobile davatelja i primatelja sinkronizirane su s primjenom hormona; važna je uska sinkronizacija kako bi se osiguralo prebacivanje embrija u odgovarajuće materničko okruženje.

    Oprema za prijenos embrija

    Pokretanje programa prijenosa embrija zahtijeva postavljanje specijaliziranog laboratorija. Oprema za prijenos embrija komercijalno je dostupna od većine tvrtki koje prodaju zalihe za uzgoj kopitara. Osim uobičajene opreme koja se koristi za rutinski potpomognut uzgoj, kao što je ultrazvučni stroj, potrebna je i sljedeća:

  • Foley kateteri za ispiranje maternice davatelja. Ovo je posebna vrsta katetera koji se koristi za ispiranje maternice donorne kobile za oporavak zametaka. Balon na njegovom kraju omogućuje smještanje katetera u cerviks kobile, sprječavajući gubitak tekućine tijekom postupka ispiranja.
  • Dodatne cijevi i priključci pričvršćeni su na kraj Foleyjevog katetera kako bi se unijela i isprala tekućina iz maternice kobile.
  • Posebni filtri za oporavak embrija iz tekućine koja se ispire.
  • Mikroskop za seciranje koji traži embrij.
  • Posude za sterilnu kulturu, pipete za kapilarno staklo i razna laboratorijska pomagala.

    Sredstvo za ispiranje koje se najčešće koristi za prijenos embrija je Dulbeccova fiziološka otopina fosfatno punjena (DPBS), dodana 10% fetalnim serumom teleta i antibioticima. Ovaj medij također se koristi za ispiranje i prenošenje embrija u maternicu primatelja. Medij se može kupiti u tekućem ili u obliku praška i rekonstituirati u laboratoriju. Kao alternativu DPBS-u, koji je skup, neki vježbači umjesto toga koriste Lactated Ringer Solution.

    Prije pokušaja obnavljanja zametaka, sve posuđe i sredstva treba zagrijati na tjelesnu temperaturu u inkubatoru kako bi se izbjegao hladni šok za embrij. Sva oprema treba biti ili jednokratna ili pravilno isprana i sterilizirana prije upotrebe. Za pranje opreme za prijenos embrija ne smiju se koristiti deterdženti ili dezinficijensi jer mogu ostaviti ostatke koji mogu ugroziti održivost embrija. Oprema se ispire samo toplom vodom iz slavine i temeljito se ispire destiliranom vodom. Kateteri, cijevi i filtri za višekratnu upotrebu prije upotrebe trebaju se sterilizirati plinom.

    Odvojeni Foley kateteri trebaju biti rezervirani za postupke oporavka embrija, a ne miješati se s onima koji se koriste za ispiranje maternice kobila s infekcijama.

    Odabir primatelja za prijenos embrija

    Vrijedno je uložiti vrijeme i novac u odabir optimalnih primatelja, jer bi bilo trošno ulagati resurse i stručnost u uzgoj kobile darivatelja i oporavak embrija, a zatim ga smjestiti u maternicu kobile koja ne bi mogla nositi ždrebicu na termin. Stoga sve kobile kupljene u svrhu da postanu primatelji programa za prijenos embrija trebaju biti podvrgnuti kompletnom ispitivanju ispravnosti uzgoja. Sve kobile koje uđu u program primatelja trebaju proći sve aspekte BSE-a i imati zdrav endometrij (sluznicu maternice) kada se procjenjuje u uzorku biopsije.

    Važna je i dob primatelja. Vjerojatnije je da će zrela, ali relativno mlada kobila (stara 5 do 8 godina) moći nositi ždrebicu na termin. Često se kobile kupljene kao primatelji nabavljaju javnim dražbama, a starost nije poznata. Treba biti siguran u procjenu dobi procjenom zuba.

    U idealnom slučaju, kobile u programu primatelja trebaju biti odabrane u skladu s veličinom tijela sličnom ili malo većom od veličine pasmine kobile darivatelja. Poznato je da će veličina kobile utjecati na veličinu ždrebice, bez obzira na genetski unos donatora.

    Konačno, dobro je odabrati kobile s dobrom predispozicijom, ne samo zato što će se tijekom postupka mnogo lakše nositi, već i zato što mogu činiti bolje majke. S tim u svezi bi trebalo biti idealno poznavanje pozadine kobile i odabir kobile koja se u prošlosti besprijekorno kobila. Ne samo da biste sigurno znali da je kobila sposobna nositi ždrebicu na termin, već i majčinstvo kobile. Nažalost, ako ih klijent ne pruži, prošlost kobila primatelja često je nepoznata.

    Protokol usklađivanja za donatora i primatelje

    Koriste se mnogi sinkronizacijski protokoli za davatelja i primatelje, ovisno o osobnim preferencijama i iskustvu. Davatelju i primateljima daju se hormoni koji mogu manipulirati njihovim ciklusom estrusa, s ciljem da se svi istovremeno zagrijavaju. Ovi tretmani mogu varirati od davanja kobila jednim pucanjem prostaglandina, do stavljanja kobila u cjelovit raspored liječenja progesteronskim i estrogenim hicima.

    Iako je glomazan, niz snimaka progesterona / estrogena pruža najbolju sinkroniju između davatelja i primatelja. Ukratko, protokol se sastoji od dnevne injekcije kombinacije progesterona i estrogena u trajanju od 8 do 10 dana (150 mg progesterona plus 10 mg Estradiol-17b po pucanju). Ovo suzbija vlastite hormone kobile, a nakon prekida liječenja većina kobila bi se trebala zagrijati za 3 do 5 dana. Budući da neke kobile mogu ovulirati tijekom liječenja, na kraju progesteronsko-estrogenske serije obično se daje krvarenje prostaglandina radi bolje sinkronizacije.

    Oralni progestageni koji se prodaju kako bi zadržali kobile na toplini ne djeluju dobro kao za protokole sinkronizacije.

    Jednom kada se darivatelj i primatelji zagrijavaju, a kobila darivateljica se uzgaja u odgovarajućem pastuhu, ovulacija se može inducirati u svih kobila dajući im humani korionski gonadotropin. To će osigurati čvršću ovulacijsku sinkronizaciju između davatelja i primatelja. Primatelj je idealan ako je ovulirao istog dana ili jedan dan nakon davatelja. Manje idealni primatelji su oni koji ovuliraju dan prije ili dulje od datuma ovulacije davatelja.

    Nažalost, čak i najbolji protokoli za sinkronizaciju ne mogu uspjeti, a donor i primatelji ne mogu uvijek doći u sinkroniziranu toplinu i ovulirati kako se očekuje. Ovo je dobar razlog da za svaku kobilu darivatelje bude na raspolaganju više od jednog primatelja. Preporučuju se barem dva primatelja po donoru, tri bi bila idealna.

    Upravljanje uzgojem donatora Mare

    Prvi ograničavajući faktor za uspjeh programa prijenosa embrija je da kobila donor mora zatrudnjeti. Stoga je neophodno prakticirati dobro upravljanje uzgojem kobile donatora.

    Kobilica darivateljica može se uzgajati svježim ili transportiranim sjemenom. Važno je da je sjeme kvalitetno i da je pastuh dobro utvrđen. Očito, idealni pastuh za kobilju nije uvijek izabran s obzirom na njegov potencijal plodnosti. Međutim, treba izbjegavati stare i plodne stabljike kako bi se spriječilo unošenje još jednog čimbenika koji može spriječiti uspjeh programa prijenosa zametaka. Iz tog istog razloga treba izbjegavati uporabu smrznutog odmrznutog sjemena.

    Optimalno upravljanje uzgojem sastoji se od uzgoja kobile tijekom estrusa što je moguće bliže ovulaciji. U idealnom slučaju, reproduktivni trakt davatelja i primatelja treba pregledavati svakodnevno palpacijom i ultrazvukom po rektumu kako bi se utvrdilo optimalno vrijeme za uzgoj davatelja i procjena sinkronizacije s primateljima.

    Kada se uzgaja, davatelju se mora dati injekcija humanog korionskog gonadotropina da inducira ovulaciju, a primatelji se tretiraju na sličan način (ali ne i uzgajani) za čvršću ovulacijsku sinkroniju.

    Ovulaciju treba uvijek potvrditi ultrazvučnim pregledom. Dan ovulacije smatra se 'danom 0', a maternica davatelje kobile obično se ispira 7. dana nakon ovulacije.

    Postupak sakupljanja zametaka

    Oporavak embrija iz kobile darivatelja obično se izvodi u postvulaciji 7. dana. Prvo, kobila se provjerava palpacijom i ultrazvukom po rektumu kako bi se utvrdio ton i izgled maternice. Kobilica koja je trudna vjerojatno će imati vrlo toniranu, homogenu maternicu, zatvoren cerviks i neće biti tekućine u maternici kako se vizualizira ultrazvukom. U ovom trenutku, zametak je premali da bi se mogao vidjeti na ultrazvuku.

    Kobila se priprema za oporavak zametaka čišćenjem perinealnog područja (vulve, anusa i stražnjice) pilingom jodova povidon (Betadine) tri puta i temeljitim ispiranjem vodom nakon svakog pilinga. Nakon izdašnog ispiranja područje se osuši čistim papirnatim ručnicima.

    Osoba koja vrši oporavak embrija treba nositi čiste rukavice za palpaciju i sterilne rukavice, a za podmazivanje treba koristiti sterilnu mliječ na vodi. Jednom rukom uvodi se u vaginu kobile kako bi prošao Foleyev kateter kroz cerviks i u tijelo maternice. Zatim se balon katetera napuha zrakom, koristeći malu štrcaljku, i tako se sigurno smjesti unutar grlića maternice kako se ne bi izgubila tekućina tijekom ispiranja maternice.

    Potrebne su najmanje dvije osobe za provođenje postupka skupljanja zametaka, jedna drži kateter u traktu kobile i pomoćnik koji pomaže u ubacivanju i oporavku tekućine. Jedna litra tekućine gravitacijom se uliva u maternicu kobile, a zatim se obnavlja u velikom staklenom cilindru ili izravno prolazi kroz filter da bi se zamio embrij. To se ponavlja tri puta.

    Neku tekućinu treba držati unutar filtra za oporavak da se izbjegne isušivanje embrija. Nakon što je postupak oporavka završen, tekućina u filtru dekantira se u Petrijevu posudu. Pretraživanje embrija provodi se pod povećalom mikroskopom za seciranje.

    Postupak prenošenja embrija

    Ako se oporavak učini na postvulaciju 7. dana, zametak treba biti u fazi blastociste i iskusan operater treba ga lako vizualizirati pod secirajućim mikroskopom.

    Kad je pronađen, zametak se ispere u sterilnom DPBS s 10 posto serumom telećega teleta. Embriji se mogu nositi s 0,25 ml francuske sjemenke za zamrzavanje sjemena ili staklenim pipetama spojenim na gumenu žarulju ili u malu tuberkulinsku štrcaljku.

    Embrio se obično prenosi transcervikalno, tj. Kroz grlić kobile kao da vrši umjetnu oplodnju. Za ovu svrhu:

  • Odabrani primatelj spreman je za prijenos umotavanjem i vezanjem repa. Njezina maternica mora biti provjerena na ton i dokaze tekućine. Embrion se nikada ne smije prenijeti na kobilu koja ima tekućinu u maternici.
  • Zatim se perinealno područje primačke kobile temeljito pročišćava kako je objašnjeno za darivatelja.
  • Embrio se može ubaciti u pipetu za oplodnju spojenu na 5 ml Air-Tite špricu. Najprije se u špricu napuni oko 1 ml zraka, a zatim se pipeta napuni s tri mala džepa medija razdvojenim džepovima zraka, a džep s tekućinom u sredini sadrži zametak.
  • Osoba koja provodi postupak prijenosa trebala bi nositi kiruršku sterilnu rukavicu preko čiste plastične rukavice dužine ramena. Pipeta se ubacuje u vaginu i pažljivo prolazi kroz cerviks. Jednom kada se napreduje u maternicu, klip se gurne naprijed i zametak ubrizgava u maternicu.
  • Kobilu primatelja treba pregledati na trudnoću oko 7 dana nakon prijenosa.

    Druga mogućnost je izvršiti kirurški prijenos embrija. To se izvodi sa sedaciranim recipijentom u stojećem položaju kroz rez na boku koji omogućava eksteriorizaciju maternice. Ne postoji očita prednost u prijenosu embrija kirurškim putem, a postupak je traumatičniji za kobilu.

    U nekim slučajevima, vlasnici ili stručnjaci koji izvršavaju prijenos embrija odlučuju ne imati primatelje embrija za datu kobilu darivatelja. Na taj se način izbjegavaju problemi s kupnjom, provjerom i održavanjem primatelja, kao i sa troškovima i radom koji je povezan sa sinkronizacijom. U tom slučaju, oporavljeni zametak može se isporučiti u referalnu ustanovu koja u brojnom trenutku ima brojne primatelje na raspolaganju za prijenos. Nedostaci ove alternative su rizici vezani uz otpremu embrija i to što se stopa trudnoće može malo smanjiti ako se zametak ne prebaci odmah nakon sakupljanja.

    Za otpremu, embriji se pakiraju u sterilnu bočicu koja sadrži komercijalizirani medij, Hams F-10, koji je puferiran difuziranjem smjese od 90 posto dušika, 5 posto kisika i 5 posto ugljičnog dioksida. Pripremljeni medij može se naručiti od objekta za prijenos neposredno prije provođenja postupka oporavka embrija. Ovaj medij također je nadopunjen serumom teleće tele i antibioticima.

    Nakon što se sakupi i ispere, zametak se stavi u sterilnu plastičnu bočicu od 3 ml koja sadrži ravnotežni topli medij, a zatim se kao mjera opreza smjesti u 50 ml medija koji sadrže epruvetu za centrifugu.

    50 ml ml cijev je spremljena u Equitainer za hlađenu pošiljku.

    Pakirane embrione treba isporučiti zrakoplovnom ili preko noći kurirskom službom, a prenijeti čim stignu do objekta za prijenos, optimalno prije 24 sata nakon povratka.


    Gledaj video: Age of Deceit 2 - Hive Mind Reptile Eyes Hypnotism Cults World Stage - Multi - Language (Lipanj 2021).